全自动磁珠提取仪
KingFisher技术的工作原理:样品、溶液和磁珠置于微孔板或管中,磁棒表面套有专门的磁套用于保护磁棒,避免其与样品/溶液/磁珠直接接触。磁棒的工作模式可以分为以下四种(以样品管为例):
1、收集磁珠:在磁珠收集过程中,磁棒插入磁套,与磁套一起在样品管中上下移动,混匀的磁珠被磁棒吸附在磁套的下沿。完成收集的磁棒与磁套一起升起,等待转移至下一个位置。
2、释放磁珠:当完成磁珠的收集后,磁棒与磁套一起转移到下一个的样品管位置,准备释放磁珠。在释放过程中,磁棒保持静止(高位),而磁套下降进入样品管(低位),这使得磁套下沿的被吸附的磁珠脱离磁棒的吸引,释放进入样品管。磁套继续在溶液中上下运动,使磁珠在溶液中充分混合。
3、清洗磁珠:磁珠清洗是磁珠提取纯化中z为关键的一步。通过清洗,可以将那些与磁珠非特异性结合的杂质洗去,从而提高产物的纯度。在清洗时,磁套下降进入溶液,而磁棒停留在上方,通过磁套的上下运动,使得磁珠在溶液中充分混合。为了地实现清洗效果,可以选择不同的混合速度用于优化实验结果,如Bindlt软件支持5种不同的混合模式,而且不同速度之间可以进行任意组合。此外,经优化设计的磁套,确保在磁头转移时没有任何挂液现象。
4、磁珠洗脱:经过清洗缓冲液处理的磁珠,通过磁棒转移至盛有洗脱液的样品管位置,进行洗脱,其过程与释放磁珠类似。在洗脱过程中可以选择进行动能洗脱或孵育。
动能洗脱是指通过磁套的上下运动,将磁珠与洗脱液充分混合接触,配合孵育加速样品从磁珠上释放的过程。在洗脱时,通常采用小体积洗脱,如初始样品200μl,洗脱液50μl,这样通过洗脱,就可将样品浓缩4倍,从而提高产物的浓度。
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