HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高。(转染一般以50%密度铺板,待细胞刚刚贴到皿壁上后(一般8-10小时),即可进行转染操作)
细胞特性
1)来源:人胚胎肾脏
2)形态:上皮细胞样,贴壁生长,贴壁能力较弱
3)含量:>1x106细胞数
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用
l培养条件:
1)准备DMEM(推荐awcell-0001)培养基;优质胎牛血清,10%;L-谷氨酰胺(2mM)1%;NEAA 1%;双抗1%
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
l注意事项:
人胚肾细胞293T该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞,传代可以参考以下方法:
1.收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。
3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
人胚肾细胞293T细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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