多酚氧化酶(PPO)测试盒
微量法 100管/48样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
PPO(EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶, 能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
测定原理:
PPO 能够催化邻苯二酚产生醌,后者在 525nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:5mL×1 瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)或果汁样本的处理:
按照血清(浆)或果汁体积(mL):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL血清(浆)或果汁加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
多酚氧化酶(PPO)测试盒
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